Чумной микроб является факультативным анаэробом. Растет на простых питательных средах (МПА, МПБ, агар Хоттингера, агар Мартена) при рН 6,9-7,2. Оптимальная температура роста. Агар для подсчета микроорганизмов в воде, 500 г/уп. Питательный агар расплавляют в водяной бане при 90 °C, тотчас же вынимают из бани, охлаждают до 50 °C и добавляют 20% сыворотки крупного рогатого скота.
Экспресс-методы (МФА и РНАт) для обнаружения возбудителя бруцеллеза
Среда имеет розовато-желтоватый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в бруснично-красный цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными. Техника посевов Метод Дригальского: Каплю исследуемого материала вносят в первую чашку Петри и стерильным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем не прожигая его в пламени горелки делают такой же посев во второй и третьей чашках. С каждым посевом бактерий на шпателе остается все меньше и, при посеве на третью чашку, бактерии будут распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от друга и будут образовываться изолированные колонии. Посев петлёй параллельными штрихами Посев петлёй параллельными штрихами Колония - это видимое изолированное скопление представителей одного вида микроорганизмов, образующееся при размножении одной бактериальной клетки на плотной питательной среде. Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по культуральным признакам.
Для выделения, культивирования и идентификации микроорганизмов в лабораторных условиях используют различные искусственные питательные среды, которые в зависимости от назначения подразделяют на группы: -обычные, или простые, - для выращивания большинства аэробов и факультативных анаэробов; -специальные - для культивирования микробов, которые не растут или дают слабый рост на простых питательных средах; -селективные - для выделения культур одною рода или вида, имеющих преимущество в размножении перед другими представителями микрофлоры; -дифференциально-диагностические предназначенные для выявления культурально-биохимических особенностей бактерий, -среды накопления обогащения - употребляемые для увеличения численности микробов, наличие которых в исследуемом материале незначительно, при подавлении роста посторонней микрофлоры. Основой большинства питательных сред животного происхождения является мясная вода, для некоторых - печеночная вода. Мясная вода. Свежую нежирную говядину или конину освобождают от костей, жира и сухожилий, пропускают через мясорубку или нарезают мелкими кусочками, заливают дистиллированной водопроводной водой в соотношении 1: 2 на 500 г мяса 1000 см3 воды и выдерживают 15 - 18 ч в прохладном месте. Затем настой кипятят в течение 40 мин - 1 ч и снимают накипь. Свежую говяжью печень, освобожденную от жира пленок, Измельчают на мясорубке и заливают водопроводной водой из расчета 1: 2, настаивают в течение 1 ч и кипятят 30 мин при постоянно помешивании.
После отстаивания фарш удаляют, доводят до первоначального объема дистиллированной водой и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Основной раствор перевар Хоттингера. Кипятят в течение 15-20 минут до свертывания белков цвет мяса станет серым. Мясо вынимают шумовкой и пропускают через мясорубку, а оставшуюся жидкость фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 8,0. Через 1-2 ч после добавления поджелудочной железы или панкреатина проверяют реакцию, устанавливают pH 7,4-7,6 и оставляют смесь для переваривания на 7 -16 сут при комнатной температуре до образования осадка. Первые 3-4 сут переваривания ежедневно встряхивают жидкость не менее трех раз в сутки, в дальнейшем встряхивать можно реже.
За 1- 2 сут до окончания переваривания встряхивание прекращают, чтобы гидролизат отстоялся. Содержимое бутыли взбалтывают 2-3 раза в сутки с открыванием пробки. Конец переваривания характеризуется следующими признаками: жидкость над осадком просветляется и принимает соломенно-желтый цвет. Приготовленный гидролизат можно хранить пять месяцев. Перед употреблением жидкость вновь фильтруют. Пептонная вода.
Пептонная вода может быть использована взамен мясо-пептонного бульона. Мясо-пептонный бульон МПБ. К 1000 см3 мясной воды добавляют 10 г сухого пептона и 5 г хлорида натрия, кипятят в течение 30 мин, устанавливают необходимую реакцию, после чего добавляют воду до первоначального объема. Мясо-пептонный бульон предназначен для культивирования аэробных микроорганизмов и изучения показателей роста в жидкой питательной среде по помутнению среды, наличию и характеристике осадка, образованию пристеночного кольца, пленки. Мясо-пептонный агар МПА. К 1000 куб.
Мясо-пептонный агар предназначен для культивирования аэробов и изучения характера роста микробов по величине и форме колоний, линии края, цвету, блеску, прозрачности, консистенции и некоторым другим признакам. Полужидкий агар ПЖА. Готовый полужидкий агар охлаждают столбиком, среда должна быть совершенно прозрачной. Полужидкий агар используют для определения подвижности микроорганизмов. С этой целью посев тест-культур проводят уколом в столбик среды, не прокалывая до дна 5-6 мм: подвижные культуры дают диффузный рост и вызывают помутнение всей питательной среды, неподвижные - растут по уколу, среда остается прозрачной, штаммы, обладающие слабой подвижностью, дают помутнение отдельных участков агара обычно вблизи укола.
Третья стадия контроля — Среда передаётся в Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов, где подтверждается полное её соответствие с техническими условиями и прочими нормативами. Сейчас сильно распространены сухие Питательные среды, которые более доступны и имеют цену значительно ниже «живой» среды. Будьте аккуратны при приобретении такого Товара, так как качество его значительно ниже! Show likes Такой большой перечень, а самого полезного агара нет - Агара Чапека!
Хорошо размешивают, после чего снова подщелачивают смесь до рН 7,8—8,0 и повторяют такое подщелачивание через 30 минут. Отсутствие сдвига реакции смеси в сторону окисления указывает не недоброкачественность фермента. Через 1—2 часа после добавления фермента опять проверяют реакцию и устанавливают рН 7,4—7,6. При этой реакции оставляют смесь для переваривания на 7—10—16 дней при комнатной температуре. Первые 3—4 дня переваривания ежедневно проверяют и исправляют реакцию. В эти дни также встряхивают перевар не менее 3 раз в сутки. В дальнейшем проверку реакции производить нецелесообразно, а встряхивать можно реже; за 1—2 дня до окончания переваривания встряхивания совсем прекращают, чтобы перевар отстоялся. По окончании гидролиза перевар фильтруют через полотняный или бумажный фильтр, разливают в бутыли и стерилизуют 30 минут при давлении 1 атм. Перед употреблением фильтруют. А Поджелудочную железу можно применять свежую, замороженную или соленую. Свежую поджелудочную железу можно консервировать впрок. Для этого ее очищают от жира, пропускают через мясорубку и закладывают в стерильную банку, куда добавляют столько глицерина, чтобы он покрыл поверхность. В таком виде ее можно хранить на холоду 2—3 месяца. Консервировать поджелудочную железу можно также поваренной солью. В таком виде железа хранится до 6 месяцев. Если железа не свежая, а соленая, она удовлетворительно хранится и без глицерина. Казеиновый перевар. Пищевой кислотный казеин в виде сухого желтоватого порошка является отходом молочной промышленности, характеризуется полноценным составом аминокислот и высокой питательностью. После прибавления казеина снова устанавливают прежнюю реакцию. Размешивание и подщелачивание производят несколько раз, каждые 30 минут, пока казеин не разбухнет. Через 30 минут опять устанавливают реакцию и переливают смесь в бутыль. В дальнейшем поступают так же, как при изготовлении перевара из мяса. Переваривание казеина при комнатной температуре продолжают 16—20 дней. Перевар из кровяных сгустков. Среды из кровяных сгустков характеризуются высокой питательностью и значительной буферностью. Кровяные сгустки промывают на решетке водой и дают воде стечь. Сгустки взвешивают. Наливают в кастрюлю тройное по весу сгустков количество водопроводной воды и доводят ее до кипения. В кипящую воду постепенно опускают сгустки и кипятят 20—30 минут до просветления жидкости; образующуюся пену снимают шумовкой. После кипячения сгустки вынимают из жидкости и нарезают ножом на мелкие кусочки. Заливают в открытом сосуде отваром из расчета на 1 кг сгустков 3 л отвара, подщелачивают до рН 8,0—8,2. Выкипевшее количество жидкости доливают дистиллированной водой. В дальнейшем поступают, как указано для мясного перевара. Среды из трипсиновых переваров, особенно из казеина, обладают достаточной буферностью и реакцию после стерилизации не меняют. Мясо-пептонный бульон МПБ. Концентрированный мясо-пептонный бульон готовят на особой мясной воде 1 кг мяса заливают 1 л воды. Такой бульон служит для выращивания анаэробных и других микробов. Мясо-пептонный агар МПА. Он является веществом полисахаридной природы, содержит незначительное количество азота и не представляет собой питательный субстрат. Кипятят, помешивая, до полного расплавления агара. Свернувшиеся хлопья белка адсорбируют взвешенные частицы и осаждаются на дно. Проверяют и исправляют реакцию среды. Из расплавленного стерильного мясо-пептонного агара приготовляют скошенный и прямой агар агар столбиком. В первом случае пробирки укладывают горизонтально до полного застывания, во втором — пробирки помещают в штатив вертикально.
Размер: обычно 0. Нейссерии менингита: Типичная колониальная морфология: колонии от средних до крупных. Цвет: серо-голубой. Консистенция: Мукоид. Колонии N. Вокруг колоний не должно быть обесцвечивания среды. Важно отметить, что эти наблюдения специфичны для видов Neisseria и могут незначительно варьироваться в зависимости от штамма и других факторов. Подтверждающие тесты, такие как Окрашивание по Граму и биохимические тесты должны быть выполнены для точной идентификации штаммов Neisseria. Кроме того, после 48 часов инкубации планшет для теста на стерильность должен оставаться прозрачным, что указывает на отсутствие какого-либо микробного роста. Это важно для проверки стерильности самой среды. Интерпретацию результатов на модифицированном агаре Тайера-Мартина следует проводить путем сравнения наблюдаемой морфологии и характеристик колоний с ожидаемыми характеристиками видов Neisseria. Культура и изоляция Для культивирования и выделения Neisseria gonorrhoeae обычно выполняются следующие шаги: Сбор образцов: Уретральные или эндоцервикальные образцы собирают с помощью тампонов с пластиковыми или проволочными стержнями и наконечниками из вискозы, дакрона или альгината кальция. Тампон используется для сбора образца из соответствующего места. Инокуляция культуральных чашек: Собранный образец инокулируют непосредственно на чашки для культивирования. Тампон наносится штрихом или прокатывается на поверхности культуральной среды. Модифицированный агар Тайера-Мартина обычно используется в качестве селективной и обогащенной среды для выделения N. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы обеспечить надлежащую инокуляцию культуральной среды. Инкубация: Планшеты с инокулированными культурами сразу же помещают в среду, обогащенную СО2. Характеристики колонии: После инкубации чашки с культурами исследуют на предмет роста и характеристик колоний. Колонии Neisseria gonorrhoeae обычно выглядят как маленькие, непрозрачные, от серовато-белых до бесцветных, приподнятые, блестящие и гладкие колонии. Эти колонии часто описываются как имеющие слизистый или влажный вид. Важно отметить, что хотя внешний вид, описанный выше, типичен для N. Процесс культивирования и выделения позволяет выращивать и размножать N. Контроль качества Контроль качества модифицированного агара Тайера-Мартина агар МТМ обеспечивает надежность и эффективность среды для выделения и культивирования патогенных видов Neisseria. Цвет и прозрачность приготовленной среды: Базальная среда должна образовывать гель желтого цвета, от прозрачного до слегка опалесцирующего. После добавления гемоглобина или стерильной лизированной крови и добавок среда должна образовывать непрозрачный гель шоколадного цвета в чашках Петри. Выполняя эти тесты контроля качества, лаборатории могут убедиться, что агар MTM подходит для его предполагаемой цели, обеспечивая точные и надежные результаты при выделении и идентификации патогенных штаммов Neisseria. Использование модифицированного агара Тайера-Мартина Модифицированный агар Тайера-Мартина агар МТМ имеет несколько важных применений в микробиологии, особенно при выделении и культивировании патогенных видов Neisseria. Вот основные области применения агара MTM: Выделение видов Neisseria: Агар MTM специально разработан для селективного выделения и культивирования патогенных видов Neisseria, таких как Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitidis. Эти бактерии ответственны за инфекции, передающиеся половым путем, гонорею и менингококковый менингит соответственно. Агар MTM обеспечивает подходящую среду, которая способствует росту этих патогенных штаммов Neisseria, подавляя при этом рост других микроорганизмов, присутствующих в клинических образцах.
Классификация питательных сред
Через 6 инкубации из первой и второй среды накопления делают высев на Щелочной агар, или агар Хоттингера, или агар Мартена. Добавление 2% агара обеспечивает получение плотной среды — агар Мартена. Бульон Хоттингера готовят из триптического гидролизата (перевара) мясных отходов — фасций, жира. Агар для подсчета микроорганизмов в воде, 500 г/уп.
питательная среда транспортная (жидкая) для культивирования бруцеллезного микроба
Менингококки могут долго существовать в носоглотке. Из носоглотки они могут попасть в кровь менингококкемия с развитием лихорадки и геморрагической сыпи. Наиболее частым осложнением менингококковой инфекции является менингит или менингоэнцефалит воспаление мозговых оболочек. Инкубационный период — 5 - 7 дней. Гной с мозговых оболочек стекает к основанию черепа и проникает в спинномозговой канал. Основные симптомы менингита связаны с поражением мозговых оболочек и развитием общей интоксикации: быстрый подъемом температуры, озноб, сильная головная боль, рвота. Иммунитет: после заболевания остается стойкий иммунитет.
Лабораторная диагностика. Исследуемый материал: кровь, спинномозговая жидкость. Спинномозговую жидкость центрифугируют. Методы диагностики: 1 бактериоскопический: изосадка делают мазок и окрашивают по Граму.
Кипятят в течение 15-20 минут до свертывания белков цвет мяса станет серым. Мясо вынимают шумовкой и пропускают через мясорубку, а оставшуюся жидкость фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 8,0. Через 1-2 ч после добавления поджелудочной железы или панкреатина проверяют реакцию, устанавливают pH 7,4-7,6 и оставляют смесь для переваривания на 7 -16 сут при комнатной температуре до образования осадка. Первые 3-4 сут переваривания ежедневно встряхивают жидкость не менее трех раз в сутки, в дальнейшем встряхивать можно реже. За 1- 2 сут до окончания переваривания встряхивание прекращают, чтобы гидролизат отстоялся. Содержимое бутыли взбалтывают 2-3 раза в сутки с открыванием пробки. Конец переваривания характеризуется следующими признаками: жидкость над осадком просветляется и принимает соломенно-желтый цвет. Приготовленный гидролизат можно хранить пять месяцев. Перед употреблением жидкость вновь фильтруют. Пептонная вода. Пептонная вода может быть использована взамен мясо-пептонного бульона. Мясо-пептонный бульон МПБ. К 1000 см3 мясной воды добавляют 10 г сухого пептона и 5 г хлорида натрия, кипятят в течение 30 мин, устанавливают необходимую реакцию, после чего добавляют воду до первоначального объема.
При выращивании Neisseria meningitidis обычно начинают с обычно стерильной биологической жидкости крови или спинномозговой жидкости , поэтому используют простой шоколадный агар. Агар Тайера-Мартина был первоначально разработан в 1964 году, а его улучшенный состав был опубликован в 1966 году.
Known as overgrowth, note that the non-selective chocolate agar medium on the left, due to its composition, allowed for the growth of organismal colonies other than those of Neisseria gonorrhoeae, while the selective Thayer—Martin medium on the right, containing antimicrobials that inhibit the growth of organisms other than N. It is used for culturing and primarily isolating pathogenic Neisseria bacteria , including Neisseria gonorrhoeae and Neisseria meningitidis , as the medium inhibits the growth of most other microorganisms.
Факторы патогенности микроорганизмов
Питательные среды. Для культивирования штаммов использовали 1% пептонную воду (рН 7,8); 2% агар Мартена (рН 7,7); 0,3% агар Мартена (рН 7,7). кровяной агар, шоколадный агар, среду Эндо, Плоскирева, Мак-Конки и др. В их составе 1,5 – 2,0% агара. Полужидкие питательные среды используют для хранения культур, реже для. Главная. Питательные среды. Агар мясопептонный (МПА) готовый, 0,4 л. среды: теллурит-флоримицин-хлоридная среда; агар Мартена; мясо-пептонный агар с теллуритом калия; мясо-пептонный печеночный агар с 1% глюкозы и 2% глицерина. Полужидкий агар используют для определения подвижности микроорганизмов. МакКонки агар без кристаллического фиолетового. 51036 1 упак.
Возбудители менингита, туберкулеза и дифтерии
Известны питательные среды для выделения бруцелл агар Мартена, агар Альбими, сывороточно-декстрозный агар, глюкозоглицериновый агар, Эритрит-агар (2, 3, 4). Чумной микроб является факультативным анаэробом. Растет на простых питательных средах (МПА, МПБ, агар Хоттингера, агар Мартена) при рН 6,9-7,2. Оптимальная температура роста. 5 мл расплавленного и охлажденного полужидкого агара Мартена с 3% NaCl, полученную смесь выливают вторым слоем на чашки Петри с застывшим плотным агаром Мартена с 3% NaCl. В горячую основу агара Мюллера–Хинтона добавить 2 мл приготовленного раствора ци-стина, тщательно перемешивая, довести рН до 7,7 и простерилизовать 10 мин при 0,5 ат-мосферы. Для приготовления сред с красками питательный агар Альбими расплавляют, охлаждают до 45-50 °С и к нему стерильно добавляют основной раствор стандартной краски. Мясо-пептонный агар (МПА) – получают путей добавления к МПБ arap-arapa (1,5–3%). Если МПА распределен по диагонали пробирки или флакона – это скошенный агар.
Факторы патогенности микроорганизмов
О107 Пептон Мартена, 0,2 л в продаже с доставкой по всей России. В Санкт-Петербурге доступен бесплатный самовывоз со склада. ГлюкоФАН ГРМ-агар (Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой). Известны питательные среды для выделения бруцелл агар Мартена, агар Альбими, сывороточно-декстрозный агар, глюкозоглицериновый агар, Эритрит-агар (2, 3, 4).
Тема 5. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ
Агар для подсчета микроорганизмов в воде, 500 г/уп. Агар Мартена. Добавление 2 % агара обеспечивает получение плотной среды. Бульон Хоттингера. Готовят из триптического гидро-лизата (перевара) мясных отходов—фасций, жира. Агар Цейсслера – в форме круглой пуговицы или листа винограда колонии с зоной гемолиза. Питательный агар для обнаружения и учета и колиформных бактерий сухой (Лактозный ТТХ агар с тергитолом 7). Расплавляют агар Мартена при 90о С в водной бане. Охлаждают до 500 С и добавляют 20 % сыворотки крови КРС. Смесь перемешивают и выливают в чашку Петри, давая ей равномерно. Агар Мюллер-Хинтона или среда АГВ по 25 мл в чашках диаметром 100 мл Бульон Мартена или Хоттингера pH 7,2-7,4 Раствор тетрациклина в бульоне 256 мкг/мл Диск с антибиотиком.
Питательные среды в медицинской микробиологии
Для выращивания С. Выделенные культуры поддерживают в аэробных условиях на кровяном агаре. Культуры непатогенного вида С. Оба подвида С. Наиболее частый возбудитель диарей — C. На эритрит агаре через 2 суток образуют полупрозрачные, блестящие, влажные, плоские колонии, как бы расплывающиеся по агару. При наличии подозрительных колоний на плотных питательных средах и типичного для микроаэрофилов роста на полужидких средах из культур готовят мазки, Морфология клеток кампилобактерий в культуре. В мазках из 3-5-суточных культур, выращенных на полужидких или плотных средах, преобладают длинные спирилловидные формы С.
Culture and Isolation Specimen urethral or endocervical is directly inoculated in the culture plates swabs with plastic or wire shafts and rayon, Dacron, or calcium alginate tips is used to collect the specimen for the culture of gonococci. Small opaque, grayish-white to colorless, raised, glistening and smooth colonies are seen.
Quality control Grow N. Observe the MTM for specific colony morphology. Result and Interpretations N. After 48 hours, the sterility test plate should remain clear.
Раствор метиленовой синьки перед употреблением подогревают на водяной бане и добавляют к агару в теплом виде. После добавления этих компонентов среду тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Среда фиолетового цвета. Висмут-сульфит агар среда Вильсон— Блера. МПА рН 7,5 с индикатором, содержащим лимонно-кислый висмут, сернокислый натрий, соль Мора серноаммонийная соль железа , двуосновной фосфорнокислый натрий, глюкозу и бриллиантовую зелень. В настоящее время висмут-сульфит агар как и агар Эндо, среду Плоскирева промышленность выпускает в сухом порошкообразном виде. Применяют также среды с химическими веществами, которые изменяют окраску в результате окислительно-восстановительных редуцирующих процессов, обусловленных ферментами бактерий. Для этого готовят молоко с метиленовой си нько й. Стерилизуют текучим паром дробно. Если есть предположение, что в исследуемом материале имеется небольшое количество бактерий, то рекомендуют использовать среды накопления обогащения. Применяют для накопления бактерий паратифа. Стерилизуют текучим паром. Синтетические среды применяют для изучения метаболизма бактерий и других биологических особенностей. Их составляют из химически чистых растворимых в воде веществ, в строго определенных количествах: фосфорнокислого аммония, фосфорнокислого калия, хлористого натра, сернокислого магния, глюкозы или другого углевода, никотинамида и др. По мере необходимости готовят плотные синтетические среды путем добавления агара. Стерилизуют в автоклаве.
При выращивании Neisseria meningitidis обычно начинают с обычно стерильной биологической жидкости крови или спинномозговой жидкости , поэтому используют простой шоколадный агар. Агар Тайера-Мартина был первоначально разработан в 1964 году, а его улучшенный состав был опубликован в 1966 году.